PCR（洁净无菌）、水质/医疗实验室建设

PCR（洁净无菌）、水质/医疗实验室建设

PCR实验室通常采用非单向流送风方式，所谓非单向流，指气流流线方向不平行，风速也不一致。非单向流的气流组织方式有上送下回式、上送下侧回式、测送下回式、上送上回式、PCR实验室一般采用上送下回式。上部送风依靠高效送风口进入房间，下部回风依靠每个房间的对称分布的排风柱下部的排风口排风。目前PCR应用已得到长足的发展，已成为疫病诊断，疫情控制等方面的有力工具

详细信息

一、PCR实验室

PCR实验室通常采用非单向流送风方式，所谓非单向流，指气流流线方向不平行，风速也不一致。非单向流的气流组织方式有上送下回式、上送下侧回式、测送下回式、上送上回式、PCR实验室一般采用上送下回式。上部送风依靠高效送风口进入房间，下部回风依靠每个房间的对称分布的排风柱下部的排风口排风。

目前PCR应用已得到长足的发展，已成为疫病诊断，疫情控制等方面的有力工具，为了避免在PCR方法中出现污染及出现假阳性和假阴性结果等现象，保证结果的准确性，在实验室环境安全控制上严格做到实验室独立区域设计，功能分区明确，保证实验室洁净环境，人流物流严格分流，设计合理的压力梯度，形成有序的气流组织方向，切实做到避免交叉污染。

PCR是聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）的简称，是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA片段，可看作生物体外的特殊DNA复制。避免污染是PCR实验室设计建设首要考虑重点。

由于PCR技术的高度敏感性，PCR技术要求高、影响因素多，从样品制备到结果的产生，任何一处细微的失误均会造成结果的偏差，导致样品的假阳性和假阴性结果。

PCR实验室研究过程中，很多操作都会产生气溶胶，比如离心、混匀等操作闵。为保证环境安全，PCR实验室设计建设需独立区域设计，避免与其余环境的交叉混杂

二、PCR洁净无菌实验室：

无菌实验室主要用于微生物学、生物医学、生物化学、动物实验、基因重组以及生物制品等研究，统称洁净实验室。无菌实验室要求室内始终处于无菌状态，工作环境洁净度微生物检验洁净实验室内的环境洁净度为千级,设置于实验室内的工作台内的环境洁净度为局部百级,与微生物检验洁净室相连接的缓冲间为万级,与缓冲间相连接的更衣室和换鞋室均为10万级。

设计要求

1工作室应矮而平坦，面积仅约4米2，高度为2.2-2.3米。室内装饰应平整，光滑，无不平整，无棱角。墙壁和屋顶应使用不透水的材料制成，以便于擦洗和清洁。消毒。

2室内照明面积较大，应从外部看到室内情况。

3为确保无菌室的清洁，应在无菌室周围设置缓冲走廊，并在走廊旁设置缓冲室，缓冲室的面积可小于无菌室。

4无菌室，缓冲走廊和缓冲室配有荧光灯和紫外线灯，用于对空气进行消毒。紫外线杀菌灯应距离工作台1米，其电源开关应位于室外。

5滑动门应设置在无菌室和缓冲室的入口和出口。门和窗户应相互齐平。接缝应紧密密封。

由此可以看出，洁净实验室在标准上有严格的划分，所以在日常一定要多加注意，严格按照操作规范来做。

三、水质微生物实验室

水质微生物检测中心实验室的基本建设包含：

1、原子吸收室：原子吸收仪器应该放置在单独的实验室内(不与其它仪器混放)；仪器上方有良好的排风装置，原子吸收仪器室不得放置有机试剂，实验室应具备独立的钢瓶室，并具备相应的防爆设施，稳定的220V电源(220V±10%，无波动)，避免与大型用电设备使用同相电源，仪器室附近无震源，仪器室附近无强磁场，仪器室内安装空调，控温，除湿，仪器室应具备防异物进入措施(如防鼠等)

2、原子荧光室：原子荧光仪安装室至少应具有12平方米的面积，阳光不能直射仪器，不能有除水暖气和空调外的任何热源，墙壁和顶棚最好是经油漆刷过，防止一般涂料引起的掉肩扬尘，无腐蚀性气体、通风良好，仪器室周围不得有很大的用电设备及强震动的机械。环境温度应为(15-30)°C，且相对稳定，相对湿度不大于75%。

3、离子色谱室:

①分析室的周围不得有强磁场，易燃和强腐蚀性气体。

②室内的环境温度应在5~35度范围内，湿度应小于等于85%(相对湿度)，且室内应保持空气流畅，有条件的话最好能安装空调。

③准备好能承受整套仪器，宽高适中，便于操作的工作平台。一般工厂以水泥平台较佳(高0.6~0.8米)，平台不能紧靠墙，应离墙0.5~1.0米，便于接线及检修用。

④供仪器使用的动力线路容量应在10KVA左右，而且仪器使用电源应尽可能不与大功率耗电量设备或经常大幅度变化的用电设备公用一条线。电源必须接地良好，一般在潮湿地面(或食盐溶液灌注)钉入长约0.5~1.0米的铁棒(丝)，然后将电源接地点与之相连，总之要求接地电阻小于1欧姆即可。

4、液相色谱室：主要体现在高效率分离，对复杂的有机化合物分离制取纯净化合物，定量分析和定性分析，仪器设备主要有：高效液相色谱仪，适宜于高沸点化合物、难挥发化合物、热不稳定化合物、离子化合物、高聚物等，弥补气相色谱仪的不足。环境和实验室基础装备设计要求与气相色谙室相近

5、高温实验室：高低温实验室可以用来考核和确定电工、电子产品或材料在温度循环变化，产品表面产生高温或低温环境条件下贮存和使用的适应性。广泛应用于航空航天产品、信息电子仪器仪表、材料、电工、电子产品等行业中。

6、微生物检测室：微生物实验室应设置成独立的区域，与其他实验室分开，门口设有门禁，非相关人员不得进入，各室根据工作内容合理布局，既方便工作又不互相影响。入口处设置集中式更间，培养室根据培养条件和种类不同可设置多间(如霉菌培养室、细菌培养室、固体培养室、液体培养室等)。

①洁净实验室：自成一区，安排在实验室的靠边角落处，用密封门限制人员的进出，把有洁净要求的房间设置在人员干扰较少的地方，把辅助房间设置在外部。考虑微生物实验操作流程，方便人流与物流的份额里。为控制人员的出入(人流)，只设有一个密封门进入微生物实验室主洁净区，操作人员进入走廊然后进入准备间，并从准备间分别经过一更、二更、缓冲进入操作区。物流则由传递窗实现。排风口装有高效过滤器，送风口装有高效过滤静压箱，室内送排风曹勇上送下排方式，室内排风单侧布置，不得有障碍。余压阀自动调节室内压力，保持正压洁净状态。

②洗涤室：洗涤室房间的尺寸根据日常工作量决定，一般不小于一个单间，洗涤室的位置靠近培养室，给排水设施完善，洗涤台面须耐热耐酸，室内配器皿柜，滴水架，干燥架，边台等，地面应有良好的排水坡度和地漏。

③准备室：设实验台、试剂柜等要绝缘、耐热、实验台要耐水耐腐蚀：设置上下水装置，涉及粉末，筛分等操作，需配置相应的设备。局部排风，设排风柜。

④培养室：主要配置各种培养箱、摇床，要求温度较恒定，有足够的电力供应。

7、天平室：天平室宜采用双层窗，以利隔热防尘，同时为便于读数而设窗帘箱。天平室最好通过门斗或前室进入，以免受气流的影响。高精度微量天平、电子天平室应考虑有空调，且风速宜小。天平室内不得设置水盆或有任何管道穿过室内，以免管道渗漏、结露或在管道检修时影响天平的使用和维护。天平室内尽量不要放置不必要的家具，以减少积灰。天平室应有全室一般照明和天平台上的局部照明。局部照明可设在墙上或防尘罩内。

8、放射室：设置位置与平面布置，宜在底层设置，自成一区，宜与门急诊部、住院部邻近布置，有便捷联系。有条件时，宜采用病人通道与医护工作人员通道分开的布置方式。

四、医疗微生物实验室

微生物实验室设计包括以下几个方面：人员，培养基，菌种，设备，实验室的布局和运行，器具及工作服洗涤、存放要求，更衣流程。

1、人员从事微生物实验工作的人员应具备微生物学或相近专业知识的教育背景。检验人员数量和素质应能满足检验工作的需要。检验人员必须熟悉相关检测方法、程序、检测目的和结果评价。保证人员在上岗前接受胜任工作所必须的设备操作、微生物检验技术和实验室生物安全等方面的培训，经考核合格后方可上岗。

2、培养基培养基质量稳定可靠，有良好的促菌生长能力，具备适宜的灭菌方式，在规定的条件和环境下贮藏，通过不同菌种的接种试验并观察生长状态，进行灵敏度试验。

3、菌种标准菌株的复活和传代应当满足药典要求。试验过程中，生物样本是最敏感的，它们的活性依赖于合适的试验操作和存储条件。实验室菌种的处理和保藏的程序应标准化，尽可能减少菌种污染和生长特性的改变。工作菌株的传代次数应当严格控制，不得超过5代(从菌种保藏机构获得的标准菌株为第0代)，防止过度的传代增加菌种变异的风险。

4、设备完成相应的检定、校准、验证、确认其性能。对于一些容易造成微生物污染的仪器设备如水浴锅、培养箱、冰箱和生物安全柜等应定期清洁和消毒。

5、无菌检查室如果企业标准引用药典要求，企业应当按照2010版药典中(附录ⅪH)无菌检查法要求设置洁净间，无菌检查应在洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空区域内或隔离系统中进行，其全部过程应当严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。如企业标准中引用的GB/T14233.2的无菌试验方法，还应满足以下要求：无菌室操作台或超净工作台局部应符合洁净度100级单向流空气区域要求。无菌室在消毒处理完毕后，应检查空气中的菌落数，方法如下：取直径约90mm培养皿，无菌操作注入融化的营养琼脂培养基约20mL，在30℃~35℃培养48h证明无菌后，取3只培养皿在无菌室操作台或超净工作台平均位置打开上盖，暴露30min后盖好置30℃~35℃培养48h后取出检查。3只培养皿上生长的菌落数平均应不超过1个。

6、微生物限度检查法应在洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。检验室单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。

7、阳性对照(接种)室微生物检验需要对标准菌种、检测菌种进行各种操作。如用于培养基的灵敏度检查、无菌检查和微生物限度检查方法的验证、阳性对照、抗生素效价的微生物检定时需要的菌种及菌悬液制备、传代转接种。这些操作要处理微生物菌种，部分菌种为条件致病菌，特殊情况要用到病原菌。

如培养基灵敏度检查和无菌检查方法验证试验用到菌种为：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉。无抑菌作用供试品阳性对照试验菌种为金黄色葡萄球菌，有抑菌作用供试品对照试验菌种为大肠埃希菌、生孢梭菌、白色念珠菌。虽然医疗器械阳性对照(接种)室设计没有专门的国家或行业标准，但参考上述卫生部文件要求，并根据《实验室生物安全通用要求》GB19489– 2008规定，危害等级为Ⅱ定义为能引起人或动物发病，但一般情况下对健康工作者、群体、家畜或环境不会引起严重危害的病原体，实验室感染不导致严重疾病，具备有效治疗和预防措施，并且传播风险有限。对应危害等级 Ⅱ应采用BSL—2实验室，并配备生物安全柜。

一般情况(对应大部分医疗器械品种)：鉴于常规阳性对照(接种)，部分种类菌种在人体抵抗力低下(非健康状态)时有致病性，微生物实验室有一定的生物安全风险，建议有条件的企业尽可能使用生物安全柜，避免对操作者造成危害。特殊情况(对应少部分医疗器械品种)：属于如下情况时应遵循不低于BSL–2实验室设置，须有相应级别生物安全柜：

(1)某些含药类医疗器械，尤其是具有抗菌、抑菌功能的，其阳性对照(试验)操作可能产生耐药性菌种的；

(2)对含药(尤其是抗生素)类医疗器械灭菌能力进行效能验证需致病性、感染性菌株的；

(3)阳性对照(试验)菌种操作中有喷洒、溢出、甩溅可能的。容易产生气溶胶的行为(对液体或半流体进行摇动、倾注或搅拌操作时，将液体滴加到固体表面上或另一种液体中时，在对琼脂板划线接种、用吸管接种细胞培养瓶) 。对阳性对照(试验)室环境背景，药典未作具体规定。参考《生物安全实验室建筑规范》，二级生物安全实验室可不设空调净化系统，也可根据需要设置带循环回风的空调净化系统。但为了保护实验环境，延长生物安全柜的使用寿命，建议采用机械通风，并加装过滤装置。排风应经过处理后直排。阳性对照室应保持相对负压，这里需要强调的是“相对”二字，如阳性间相对临室为负压，但对大气可能实为正压或负压。在正压的情况下，与非洁净区或室外大气间的静压差不宜过大，以避免阳性间密闭性意外遭破坏时污染物迅速扩散。

8、培养室用于放置微生物生长的细菌培养箱、真菌培养箱和菌种保存的冰箱。室内应保持清洁，不得堆放杂物。大多数企业将其设置为一般环境，但应保持洁净，注意避免使用强效、挥发性、喷雾型的消毒剂，防止影响微生物的生长。

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